WWW.KNIGI.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     | 1 || 3 |

«2011 НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ АРМЕНИЯ ИНСТИТУТ БИОХИМИИ ИМ. Г.Х.БУНЯТЯНА ВАХЕДИАН ВАХИД РЕГУЛЯЦИЯ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА ПРОТЕОГЛИКАНАМИ ЭМБРИОНАЛЬНОГО ГЕНЕЗ ...»

-- [ Страница 2 ] --

Определяли ежедневно потребляемое количество воды (в мл/кг массы крысы) и пищи (в г/кг массы крысы). Концентрацию глюкозы в крови определяли по Glucose liquichrom Delta G-COL диагностическому тесту. Количество малонового диальдегида (МДА) определяли по Yoshika et al.(1979) и выражали в нмол/мл крови и нмол/г в печени, -токоферол в крови – по Duggan(1954) и выражали в мг/дл, активность супероксиддисмутазы (СОД) в крови – по Nishikim et al.(1972) и выражали в ед/мг белка, среднемолекулярные пептиды в крови – по Габриелян и соавт.(1981) и выражали в ед/мл, содержание белка – по Lowry et al.(1952) и выражали в мг/мл крови или мг/г ткани. Определение NАDРН зависимой О2--продуцирующей и ферригемоглобин восстанавливающей активности прооксидантных металлопротеинов (изоформы NАDРНоксидазы из мембран эритроцитов, сыворотки, компоненты клеток иммунной системы организма – селезенка, а также супрол, цитохром b5 и цитохром с) и активности ключевых антиоксидантных металлопротеинов (общая фракция Cu,Zn-SOD и MnSOD, каталаза) проводили по Симоняну и соавт. (1997,2001,2008). Содержание инсулина в крови определяли методом ELISA и выражали в U/мл. Уровень провоспалительных лимфокинов (IL-4, IL-6, IL-8) определяли методом ELISA и выражали в пг/мл крови. Ткань печени окрашивали гематоксилин/эозином, а тыакже с помощью PAS реакции. Ткань поджелудочной железы окрашивали гематоксилин/эозином, а также алдегид /фуксином.

Статистический анализ результатов исследования проводили согласно метода вариационной статистики Стьюдента-Фишера с использованием t-критерия и определением критерия достоверности p.

Определение металлопротеинов проводили в Институте биохимии НАН РА совместно с проф.М.А.Симоняном. Определение инсулина проводили в НИЦ ЕГМУ совместно с проф.

А.В.Зильфяном и кбн С.А.Авакяном. Определение интерлейкинов проводили в клиникодиагностической лаборатории ЕГМУ совместно с доц. А.Р.Давтян. Морфологические исследования проведены на базе кафедры патанатомии ЕГМУ совместно с проф.

Л.Н.Мкртчяном и на базе кафедры клинической патологии совместно с проф.А.С.Канаяном и доц.А.Г.Мхитаряном.

РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЯ И ИХ ОБСУЖДЕНИЕ

1. Влияние ЭПОМа на уровень глюкозы, потребление воды и пищи у крыс с СД Изменение уровня глюкозы в крови, а также потребление воды и пищи у крыс представлены в таблице 1. Как видно из таблицы, уровень глюкозы в крови у интактных крыс составляет мг/дл. У диабетических крыс он возрастает почти в 4 раза и составляет 494 мг/дл.

Предварительное введение ЭПОМа предотвращает столь резкое возрастание глюкозы в крови, она остается на уровне 173 мг/дл, что почти в 3 раза ниже, чем у диабетических крыс и только на 33% выше контрольного уровня (рис.1,а). Потребления воды и пищи также различается в различных экспериментальных группах. Согласно данным табл.1, потребление воды в диабетической группе возросло в 3 раза, тогда как в профилактической группе оно снизилось на 24% по сравнению с диабетической группой, однако оставалось значительно выше контрольной группы (рис.1,в). Потребление пищи в диабетической группе было на 67% выше, чем в контрольной, тогда как при предварительном введении ЭПОМа оно оказалось только на 31% выше нормы и на 22% ниже, чем у диабетических крыс (рис.1,с).

. Влияние ЭПОМа на уровень глюкозы в крови, потребление воды и пищи при стрептозотоциновом диабете (p – диабет/контроль; p1 – профилактика/контроль; p2 – профилактика/диабет) Таким образом, можно заключить, что предваритыельное введение ЭПОМа при СТЦ диабете у крыс в значительной степени (в 2,8 раз) предотвращает повышение уровня глюкозы в крови, поддерживает его близким к контрольным величинам. Что касается потребления воды и пищи, то они также проявляют тенденцию к нормализации. Однако, очевидно, что потребуется больше времени для их возвращения к исходному уровню.

Рис.1. Влияние ЭПОМа на содержание глюкозы в крови (а), потребление воды (в), потребление пищи (с) 2. Влияние ЭПОМа на показатели окислительного стресса у крыс с СД Изменения в содержании показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты представлены в таблице 2. Согласно нашим данным, содержание МДА в крови крыс с СД возросло на 33% рис.2,d), тогда как в профилактической группе оно было ниже на 26% по сравнению с интактными животными и на 40% ниже по сравнению с диабетической группой.

Что касается МДА в печени (рис.2,е), то содержание его при диабете было в 2,5 раза выше нормы. Введение ЭПОМа в значительной степени предотвращает рост содержания МДА, который оказался только на 40% выше контрольного фона и в 1,8 раз ниже, чем у диабетических крыс. Активность основного антиоксидантного фермента СОД в крови при СД (рис.2,f) выросла на 50%, тогда как на фоне введения ЭПОМ она оказалась выше нормы всего на 19% и выше, чем у диабетических крыс на 13%. В печени активность СОД (рис.2,g), по сравнению с контролем, выросла на 24%, тогда как в профилактической группе она сохранилась на контрольном уровне. Содержание главного тканевого антиоксиданта токоферола в крови у диабетических крыс (рис.2,h) понизилось на 26%. Предварительное введение ЭПОМ сохранило его содержание в пределах нормы. Среднемолекулярные пептиды (средние молекулы), которые являюся индикаторами интоксикации или воспаления, в крови у диабетических крыс (рис.2,i) возросли на 35%, тогда как в профилактической группе они оказались даже ниже нормы.

Влияние ЭПОМа на уровень МДА в крови и печени, активность СОД в крови и печени, содержание -токоферола МДА-плазма МДА-печень СОД-сыворотка СОД-печень -Токоферол Средние молекулы Рис.2. Влияние ЭПОМа на уровень МДА в крови (d) и печени (e), активность СОД в крови (f) и печени (g), содержание -токоферола (h) и средних молекул (i) в крови крыс при СТЦ диабете (в %).



Полученные результаты свидетельствуют, что при СТЦ диабете содержание промежуточного продукта перекисного окисления липидов МДА, являющегося основным маркером интенсивности этого процесса, как в крови, так и в печени значительно возрастает.

Аналогичная картина наблюдается и всодержании средних молекул. Эти изменения сопровождаются выраженным дефицитом антиоксидантов, о чем свидетельствует снижение содержания витамина Е. Повышение активности СОД как в крови, так и в печени является отражением напряжения протекторных систем, мобилизацией организма противостоять возникшему окислительному стрессу. Предварительное введение ЭПОМа в целом предотвращает развитие окислительного стресса.

3. Влияние ЭПОМ на соотношение про- и антиоксидантных металлопротеинов у Изменение соотношения про- и антиоксидантных металлопротеинов при СТЦиндуцированном СД, в том числе металлопротеинов прооксидантной активности – МПА (изоформы кислой NADPH-оксидазы или цитохрома b558, локализованного в сыворотке крови, ЭМ, клеточных мембранах селезенки-КМС, митохондриях клеток селезенки-МКС, ядрах клеток селезенки-ЯКС, а также цитохром с, цитохром b5 и сывороточный супероксидпродуцирующий липопротеин супрол) и металлопротеинов антиоксидантной активности- МАА (Cu,Zn-СОД и каталаза из цитозоля эритроцитов, общая фракция Cu,Zn-СОД и Mn-СОД и фракция каталаз из цитозоля клеток селезенки представлены в таблицах 3-6.

Как следует из таблицы 3, при СД уровень NADPH-оксидазы или цитохрома b558 (при =А530 бета полоса поглощения) значительно возрастает в ЭМ, КМС, МКС и, особенно, в ЯКС (от 81,5 до 225,0%). Уровень цитохрома с (при =А520) оказался значительно возросшим в клетках селезенки, что указывает на понижение стабильности митохондрий. Из МПА только уровень цитохрома b5 из цитозоля эритроцитов оказался пониженным.

Влияния ЭПОМа (в %) на уровень NADPH-зависимую О2- -продуцирующая Как следует из табл.4, О2- -продуцирующая активность NADPH-оксидазной фракции, изолированной из КМС, резко возрастает. Повышение этой активности выражено также для NADPH-оксидазы ЭМ, ЯКС, МКС, а также для сыворотки крови. Значительно возрастает О2- продуцирующая активность супрола. Последнее может быть обусловлено повышением перекисного окисления фосфолипидных остатков супрола (Р.Симонян и соавт., 2005).

Предварительно введенный ЭПОМ оказывает положительный регулирующий эффект, сохраняет О2- -продуцирующие активности изоформ цитохрома b558 (или NADPH-оксидазы) ближе к норме.

Влияние ЭПОМа (в %) на ферриHb-восстанавливающую активность МПА при СД Как следует из табл.5, ферри-восстанавливающая активность этих NADPH-оксидаз при СД значительно возрастает, особенно для NADPH-оксидаз мембран эритроцитов и для внелкеточнной NADPH-оксидазы, что также свидетельствует о значительном нарушении окислительных процессов. При этом ЭПОМ не оказывает существенного влияния на гомеостаз кислорода, т.к. только ферроHb или оксиHb, но не ферриHb или метHb в состоянии переносить молекулярный кислород к клеткам.

Что касается МАА, то при СД активность фракции Cu, Zn-СОД из цитозоля эритроцитов и клеток селезенки (общая фракция Cu, Zn-СОД и Mn-СОД) снижается почти в тех же пределах (табл.6). Аналогичным образом, однако несколько меньше, понижается и активность каталазы из цитозоля эритроцитов и селезенки.

Влияние ЭПОМ (в%) на СОД и каталазную активность МАА при (p 0,05, n = 6) 4. NADPH-зависимая супероксид-продуцирующая активность ЭПОМ и ее Для выяснения молекулярных и биохимических механизмов воздействия ЭПОМа необходимо выяснить соотношение участия ЭПОМа и NADPH-оксидазы в генерации АФК in vitro, что позволит понять механизм защитного действия ЭПОМа.

Инкубация электрофоретически гомогенного препарата NADPH-оксидазы (цит b558) кислой природы из МКС с ЭПОМом не вызвало изменений в форме кривых и максимума спектра оптического поглощения этого фермента в окисленной и восстановленной форме его (рис. а,б). Поэтому можно заключить, что ЭПОМ не оказывает токсического действия на изоформы NADPH-оксидазы из МКС и сыворотки крови и не изменяет редокс и оптических свойств этих ферментов, ключевых систем продукции супероксид аноина клетками иммунной системы.

Рисунок 3. А) Оптическая абсорбция спектра цит b558 (0,1 мг в 3мл раствора) из МКС (1) и цит b558 (0,04 мг в 3 мл раствора) из сыворотки крови (2) в окисленном состоянииe, до и после инкубации этих цит b558 с 8 мг ЭПОМа в течение 24 часов при 4о; б) то же самое для тех же цит b558 после инкубации с ЭПОМом в указанных ЭПОМ in vitro не обладает антиоксидантной активностью, более того, проявляет прооксидантную активность (рис.2), выделяя О2- в присутствии определенного количества NADPH. ЭПОМ определенно стимулирует процесс переноса электронов от NADPH к молекулярному кислороду, обуславливая его одноэлектронное восстановление и переход его в супероксид анион. Последний восстанавливает НТС и переводит его в формазан. Процесс образования О2- является зависимым от концентрации ЭПОМа и носит линейный характер (рис. 4,1).

Рисунок 4. Изменение уровня формазана под влиянием ЭПОМ, изоформ цит b558 из МКС и сыворотки крови. 1) Изменение плотности оптического поглощения формазана (при 560 нм) под влияние ЭПОМа (в мкг); 2) Изменение плотности оптического поглощения формазана под влиянием цит b558 из МКС ( ) или цит b558 из сыворотки Процесс такой продукции супероксидного аниона подавляется NADPH-оксидазами, полученными из МКС или сыворотки крови (рис.4,2), которые производят О2ферментативным путем. Наиболее вероятно, что указанные NADPH-оксидазы не подавляют ЭПОМ, и она переключается на конкуренцию за окисление NADPH и восстановление О2-. Нет сомнения в том, что благодаря ЭПОМу и NADPH-оксидазам производится именно О2-, который нейтрализуется (дисмутируется) электрофоретически гомогенной Cu, Zn-СОД в каталитических количествах (рис.2,3). При этом специфическая активность ЭПОМа значительно (около 2 раз) выше таковой NADPH-оксидаз из МКС и в 1, раза по сравнению с внеклеточной NADPH-оксидазы (табл.7).



Pages:     | 1 || 3 |
 



Похожие работы:

«ЭЛЕКТРОТЕХНИКА И ЭЛЕКТРОНИКА Учебно-методический комплекс по дисциплине для студентов специальности 220700.65 Автоматизация технологических процессов и производств всех форм обучения Самостоятельное учебное электронное издание Сыктывкар 2012 УДК 621.3 ББК 31.2 Э45 Рекомендован к изданию в электронном виде кафедрой теплотехники и гидравлики Сыктывкарского лесного института 11 мая 2012 г. Утвержден к изданию в электронном виде советом технологического факультета Сыктывкарского лесного института...»

«Ершов Ю.А., Зайцева Н.И., 2010 Оформление. Издательство ISBN 978-5-7038-3210-3 МГТУ им. Н. Э. Баумана, 2010 ПРЕДИСЛОВИЕ Современная биохимия, изучающая протекание химических реакций в организме, представляет обширную научную область, в которую входят почти все отрасли химии и биологии. Высокий...»

«2012 КОНФОРМАЦИОННОЕ РАВНОВЕСИЕ И РН-ЗАВИСИМОСТЬ ФЛУОРЕСЦЕНЦИИ КРАСНОГО ФЛУОРЕСЦЕНТНОГО БЕЛКА KFP А.С.Горященко1, А.Л.Русанов1, В.А.Миронов2, Б.Л.Григоренко2, А.В.Немухин2, 1 А.П.Савицкий 1 Институт биохимии им. А.Н.Баха РАН 2 МГУ им. М.В.Ломоносова, Химический факультет Публикации 1. Rusanov, A.L., Mironov, V.A., Goryashenko, A.S., Grigorenko, B,L., Nemukhin, A.V., Savitsky, A.P., Conformational Partitioning in pH-Induced Fluorescence of the Kindling Fluorescent Protein (KFP). J. Phys. Chem. B...»

«Научно-образовательное пособие Серия Медико-биологический факультет РГМУ БИОХИМИЯ КАК НАУКА: СОВРЕМЕННЫЕ СФЕРЫ ИНТЕРЕСОВ, НАУЧНЫЕ И ПРАКТИЧЕСКИЕ ДОСТИЖЕНИЯ. ПРОФИЛЬНЫЕ КАФЕДРЫ МБФ РГМУ Руководитель научно-образовательного коллектива, д.м.н., профессор Богданов Андрей Евгеньевич Москва 2010 год НОМ МБФ РГМУ. Специальность медицинская биохимия ГОУ ВПО РГМУ Росздрава, 2010г. УЧЕНИКАМ 9,10, 11 КЛАССОВ ВСЕХ ШКОЛ РОССИИ! ХОТИТЕ СТАТЬ ВРАЧАМИ БИОХИМИКАМИ? ПРИХОДИТЕ УЧИТЬСЯ В РОССИЙСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ...»

«Создание технологии История науки, философии и техники. является не только областью знаний, имеющих громадное значение для выяснения истины, ее изучение необходимо и для правильной оценки современного знания и техники, и для создания столь необходимой, особенно у нас, преемственности научного творчества. В.И. Вернадский [1]. Радиохимическая технология выделения плутония из облученного урана является, по признанию специалистов, самой сложной и опасной частью уранового проекта [2, 3]. Об этом...»

«2.3. КЛАСТЕР НАНОХИМИЯ И ЭКОЛОГИЯ Целью образования кластера является координирование научно-исследовательской и инновационной деятельности 11 учебно-научных лабораторий химического отделения Института естествознания, комплексного и более продуктивного использования закупаемого в 2008 году научного оборудования в рамках реализации ИОП, рост качества подготовки специалистов посредством повышения уровня аудиторной работы, научно-исследовательской деятельности студентов и преподавателей на...»

«Кафедра Общая и прикладная экология КОЛЛОИДНАЯ ХИМИЯ Учебно-методический комплекс по дисциплине для студентов направления бакалавриата 280200 Защита окружающей среды и специальности 280201 Охрана окружающей среды и рациональное использование природных ресурсов всех форм обучения Самостоятельное учебное электронное издание СЫКТЫВКАР 2012 1 УДК 544.77 ББК 24.6 К60 Рекомендован к изданию в электронном виде кафедрой общей и прикладной экологии Сыктывкарского лесного института Утвержден к изданию в...»

«Доктор биологических наук, профессор Александр Александрович Нейфах, возглавляющий лабораторию биохимической эмбриологии в Институте биологии развития АН СССР им. Н.К.Кольцова, — один из выдающихся представителей этой отрасли знания в нашей стране. А.А.Нейфах — автор около 150 научных публикаций и пяти монографий. Среди них выделяются такие фундаментальные работы, как Молекулярная биология процессов развития (1977), Проблемы регуляции в молекулярной биологии (1978), написанные в соавторстве с...»






 
© 2013 www.knigi.konflib.ru - «Бесплатная электронная библиотека»

Материалы этого сайта размещены для ознакомления, все права принадлежат их авторам.
Если Вы не согласны с тем, что Ваш материал размещён на этом сайте, пожалуйста, напишите нам, мы в течении 1-2 рабочих дней удалим его.