WWW.KNIGI.KONFLIB.RU

БЕСПЛАТНАЯ ЭЛЕКТРОННАЯ БИБЛИОТЕКА

 
<< HOME
Научная библиотека
CONTACTS

Pages:     || 2 | 3 |

«2011 НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ АРМЕНИЯ ИНСТИТУТ БИОХИМИИ ИМ. Г.Х.БУНЯТЯНА ВАХЕДИАН ВАХИД РЕГУЛЯЦИЯ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА ПРОТЕОГЛИКАНАМИ ЭМБРИОНАЛЬНОГО ГЕНЕЗ ...»

-- [ Страница 1 ] --

.

.00.04 - «»

2011

НАЦИОНАЛЬНАЯ АКАДЕМИЯ НАУК РЕСПУБЛИКИ АРМЕНИЯ

ИНСТИТУТ БИОХИМИИ ИМ. Г.Х.БУНЯТЯНА

ВАХЕДИАН ВАХИД

РЕГУЛЯЦИЯ ОКИСЛИТЕЛЬНОГО СТРЕССА ПРОТЕОГЛИКАНАМИ

ЭМБРИОНАЛЬНОГО ГЕНЕЗА ПРИ СТРЕПТОЗОТОЦИН-ИНДУЦИРОВАННОМ

САХАРНОМ ДИАБЕТЕ

АВТОРЕФЕРАТ

диссертации на соискание ученой степени кандидата биологических наук по специальности 03.00.04 – “Биохимия”

ЕРЕВАН

. :

,,..

..

,..

2011. 13- 1500http://aab.sci.am :

2011. « 12 »-:

,,..

Тема диссертации утверждена на ученом совете в Института биохимии им Г.Х.Бунятяна НАН РА Научный руководитель: засл.деят.науки РА, доктор биол.наук, профессор М.И.Агаджанов Официальные оппоненты: доктор биологических наук С.С.Марданян доктор фармацевтических наук, профессор М.Г.Баласанян Ведущая организация: Государственный аграрный университет Защита диссетации состоится 13 июня 2011 г. в 1500 на заседании специализированного совета 042 действующего в Институте биохимии им Г.Х.Бунятяна (Ереван, ул.П.Севака 5/1).

С диссертацией можно ознакомится в библиотеке Института биохимии им. Г.Х.Бунятяна НАН РА и на сайте http://aab.sci.am.

Автореферат разослан 12 мая 2011 г.

Ученый секретарь специализированного совета, кандидат биологических наук, доцент Р.Л.Айрапетян

ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ

Актуальность темы. Согласно данным ВОЗ, в 2000 году как минимум 171 млн человек страдали от сахарного диабета, что составляет 2,8% населения Земли [ADA,2005]. По данным Министерства здравоохранения РА в 2009 г общее число зарегистрированных больных диабетом в Армении было 50 661, что соответствует распространенности заболевания во всем мире. В США в 2010 г. среди лиц в возрасте 65 лет и старше, 10,9 млн или 26,9% имели диабет.

Около 215 000 лиц моложе 20 лет имеют диабет 1 или 2 типа. У 1,9 млн лиц в возрасте 20 лет и старше в 2010 г в США был впервые диагностирован диабет. В 2005-2008 гг на основе измерения уровня глюкозы натощак или содержания гликозилированного гемоглобина у 35% жителей США в возрасте 20 лет и старше был диагностирован преддиабет. Диабет опасен своими осложнениями, является главной причиной поражения почек, нетравматических ампутаций нижних конечностей, слепоты среди взрослого населения, главной причиной сердечных заболеваний и инсультов, седьмой по счету причиной смертности в США. Число вновь заболевших диабетом быстро растет, и по расчетам к 2030 г почти удвоится [National Diabetes Statistic, 2011] все формы сахарного диабета лечатся инсулином, причем тип 2 диабета регулируется также различными медикаментами. Оба типа диабета являются хроническими заболеваниями и обычно неизлечимы. Пересадка поджелудочной железы или –клеток практикуется с переменнным успехом при диабете 1 типа. Согласно данным ВОЗ, в 2000 году как минимум 171 млн человек страдали от сахарного диабета, что составляетр 2,8% населения Земли [ADA,2005]. Поэтому дальнейшее совершенствование методов лечения сахарного диабета продолжает оставаться исключительно актуальным.

С целью поиска новых гипогликемических средств нами был исследован протеогликан эмбрионального генеза, разработанный и запатентованный Л.Мкртчяном как новый противораковый препарат под названием “Эмбриональный противоопухолевый модулятор Мкртчяна” (ЭПОМ) [Л.Мкртчян, 2004]. Абсолютная безвредность и безопасность препарата была проверена и доказана в экспериментах, выполненных в соответствии с требованиями Фармкомитета, Агенства по безопасности лекарственных препаратов РФ. ЭПОМ состоит из широкого пула белков, выделенных главным образом из нормальных эмбриональных материалов в условиях максимально приближенных к нативным. ЭПОМ вводится в сверхнизких дозах лицам высокой онкологической группы риска. Позже было также выявлено нейропротекторное свойство ЭПОМа [К.Енкоян, 2010].

Цель и задачи исследования. Целью исследования было выявление нового профилактического гипогликемического свойства ЭПОМа.

Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи:

1. Разработать на белых крысах соответствующую модель сахарного диабета(СД).

2. Изучить влияние ЭПОМа на уровень глюкозы в крови крыс при СД, а также на количество потребляемой воды и пищи.

3. Выявить влияние ЭПОМа на уровень и активность показателей окислительного стресса 4. Определить действие ЭПОМа на содержание и активность про- и антиоксидантных металлопротеинов в крови и селезенке крыс при СД.

5. Определить изменения в содержании инсулина в крови крыс с СД под влиянием 6. Исследовать влияние ЭПОМа на содержание провоспалительных цитокинов в крови 7. Показать изменения в морфологической структуре различных органов крыс с СД под влиянием ЭПОМа.

Научная новизна работы.

Предварительное введение ЭПОМа крысам при стрептозотоциновом(СТЦ) диабете практически предотвращает повышение глюкозы в крови крыс, значительно снижает потребление воды и пищи.

Профилактическое влияние ЭПОМа способствует сохранению на нормальном уровне показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты у крыс со СТЦ диабетом.



Предварительное введение ЭПОМа при СТЦ диабете оказывает определенный регулирующий эффект на содержание и активность про- и антиоксидантных металлопротеинов у крыс.

Показано, что ЭПОМ in vitro проявляет прооксидантную активность.

Установлено, что ЭПОМ в профилактическом режиме сохраняет уровень исулина в крови у диабетических крыс в пределах нормы.

Выявлено, что предварительное введение ЭПОМа достоверно предотвращает изменения в содержании провоспалительных цитокинов при СТЦ диабете.

Предварительное введение ЭПОМа в некоторой степени предотвращает показанные при СТЦ диабете резкие нарушения структуры различных органов, сохраняет большее количество полноценных островков Лангерганса.

ЭПОМ, предварительно введенный крысам при СТЦ диабете, проявляет выраженное гипогликемическое действие.

Научно-практическое значение работы.

Впервые на СТЦ модели СД было выявлено профилактическое гипогликемическое действие ЭПОМа.

Показано, что регулирующий эффект ЭПОМа на СТЦ модели СД реализуется путем нормализации нарушенного уровня МДА и –токоферола, а также активности СОД, баланса соотношения про- и антиоксидантных металлопротеинов.

С помощью ЭПОМа возможно регулировать уровень инсулина в крови.

Достоверное отличие содержания провоспалительных цитокинов по сравнению с диабетическими крысами свидетельствует о регулирующем действии ЭПОМа на иммунный статус организма, мобилизации иммунной системы с целью предотвращения тяжелых повреждений поджелудочной железы со стороны СТЦ.

ЭПОМ in vitro не обладает антиоксидантной активностью, более того, проявляет прооксидантную активность, генерируя супероксид анион в присутствии определенного количества NADPH. Созданный за счет ЭПОМа этим механизмом супероксидный анион, очевидно, модулирует иммунную систему и инициирует процесс восстановления антиоксидантной системы. Повидимому этот механизм реализации регулирующего эффекта ЭПОМа действует и при других заболеваниях.

Апробация материалов работы. Основные положения диссертации были доложены и обсуждены International Congress of Young Scientists, April 13-14, 2010, Yerevan, Armenia;

International Congress Dedicated to 90th Anniversary of (YSMU) Foundation,, October 6-8, 2010, Yerevan, Armenia; The First Scientific Conference of Iranian Medical Students, Yerevan, Armenia, 6th October 2010; XVIII Annual Congress of the European Society of Gene and Cell Therapy, 22-25 October 2010, Milan, Italy; 5th Fraunhofer Life Science Symposium, 29- October 2010, Leipzig, Germany; FEBS Advanced Lecture Course, 20-26 February, 2011, Yerevan, Armenia.

Публикации. По теме диссертации опубликовано 7 печатных работ.

Структура диссертации. Диссертация изложена на 102 страницах компютерного текста, состоит из введения, обзора литературы, материалов и методов, результатов собственных исследований и их обсуждения, заключения, выводов, списка литературы. Содержит 12 таблиц, 2 графика, 14 рисунков.

МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ

Работа выполнена на базе кафедры биохимии Ереванского государственного медицинского униоверситета им.М.Гераци (ЕГМУ). Исследование проводили на белых беспородных крысахсамцах массой 180-200 г. Модель сахарного диабета получали с помощью стрептозотоцина(СТЦ)(Sigma). ЭПОМ был любезно предоставлен автором Л.Н.Мкртчяном.

Крыс содержали в стандартных условиях вивария при 25±2оС при 12 часовой смене темнового и светового режимав клетках по 4-5 особей в каждой на стандартной диете при свободном доступе к водее. Экспериментальный протокол был составлен согласно требованиям European Communities Council Directive (86/609/EEC) и одобрен Этическим комитетом ЕГМУ им М.Гераци.

За 18 часов до начала эксперимента животных лишали пищи. Существуют многочисленные способы создания СТЦ модели СД, в том числе путем однократного в/бр введения СТЦ в дозе от 35 до 150 мг/кг массы животного, 5-ти кратного (в течение 5 дней) в/бр введения СТЦ в дозе 35-50 мг/кг массы животного. Использовали свежеприготовленный раствор СТЦ на 0.1 N цитратном буфере (рН 4.5). В результате многочисленных экспериментов мы пришли к предпочтению создания модели СД путем однократного в/бр введения СТЦ в дозе 55 мг/кг масы крысы. Через 48 часов у крыс появлялись симптомы СД как-то полиурия, полидипсия, полифагия. Через 2 дня после введения СТЦ определяли концентрацию глюкозы в образцах крови взятой из сердца. Животные с содержанием глюкозы в крови не ниже 200 мг/дл считали диабетическими и их отбирали для эксперимента.

Животные были разделены на три группы: 1. Контрольные (интактные) животные; 2.

Животные, получившие СТЦ (СД); 3. Животные, получившие ЭПОМ в дозе 0,5 мг/100 г массы крысы, через 7 дней им дополнительно вводили СТЦ. Через 14 дней после последней иньекции животных обезглавливали под легкой нембуталовой анестезией, кровь и органы извлекали для последующего исследования. Для морфологических исследований поджелудочную железу, печень, почки, сердце фиксировали в забуференном формалине. Для определения металлопротеинов, показателей перекисного окисления липидов и антиоксидантной защиты кровь стабилизировали на 0,2% оксалате натрия, селезенку и печень охлаждали на льду.



Pages:     || 2 | 3 |